細(xì)胞名稱：PK136小鼠X小鼠

　　描述：雜交瘤細(xì)胞系PK136分泌一種小鼠單克隆抗體（IgG2a），此抗體與小鼠NK細(xì)胞起反應(yīng)。該細(xì)胞系由SP2/0-Ag14骨髓瘤和用CE小鼠脾細(xì)胞和骨髓細(xì)胞免疫的（C3H X BALB/C）F1小鼠的脾細(xì)胞融合而成。此抗體對(duì)NK特異且在有補(bǔ)體時(shí)有細(xì)胞毒作用。此抗體與不同小鼠株的細(xì)胞的反應(yīng)方式，與常規(guī)的NK1.1抗血清的反應(yīng)方式相符。

　　動(dòng)物種別：小鼠X小鼠

　　性別：

　　組織來(lái)源：B淋巴細(xì)胞；雜交瘤；

　　形態(tài)：淋巴母細(xì)胞

　　培養(yǎng)基和添加劑：DMEM培養(yǎng)基(GIBCO,貨號(hào)12800017，添加NaHCO3 1.5g/L)或Hybri-Care，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。溫度：37攝氏度。

　　供應(yīng)限制：A。僅供研究之用。

　　REFERENCE:J.Immunol.137:3742-3747,1986.PubMed:3782794 Hybridoma 3:301-303,1984.PubMed:6500587

　　PK136小鼠X小鼠培養(yǎng)步驟：

　　1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入5mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加4-6mL完全培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入6cm皿中），培養(yǎng)過(guò)夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

　　2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

　　1、對(duì)于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：

　　1.棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。

　　2.加1-2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2min，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加5ml以上含10%血清的完全培養(yǎng)基終止消化。

　　3.輕輕吹打細(xì)胞，完全脫落后吸出，在1000RPM條件下離心8-10分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。

　　4.按5-6ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)液，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含5-6 ml培養(yǎng)液的新皿中或者瓶中。

　　2、對(duì)于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：

　　方法一：收集細(xì)胞，1000RPM條件下離心8-10分鐘，棄上清液，補(bǔ)加1-2ml培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或瓶中。

　　方法三：可選擇半數(shù)換液方式，棄半數(shù)培養(yǎng)基后，將剩余細(xì)胞懸起，將細(xì)胞懸液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基新皿中或者瓶中。

　　1）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。棄培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細(xì)胞變圓脫落后，進(jìn)行離心收集，1000RPM條件下離心8-10分鐘，去除上清，按凍存數(shù)量加入到凍存液中。