品牌：lifeglobal 圖7 global® DMSO 胚泡玻璃化冷凍套裝 ·2瓶1ml 平衡液，包含DMSO、乙二醇和10mg/ml的HSA，使用 global® w/HEPES緩沖液。 ·2瓶1ml 玻璃化冷凍液，包含DMSO、乙二醇、蔗糖和10mg/ml的HSA，使用 global® w/HEPES緩沖液。 ·4個(gè)SunIVF embryo GPS® 操作皿，產(chǎn)品經(jīng)過(guò)無(wú)菌、內(nèi)毒素和MEA檢測(cè)。 global® DMSO 胚泡玻璃化冷凍規(guī)程 使用說(shuō)明 1.玻璃化冷凍操作應(yīng)該在室溫（20-27°C）下進(jìn)行。使用前把平衡液和玻璃化冷凍液放置在室溫下。以下操作步驟不要使用顯微加熱臺(tái)。在標(biāo)本在平衡液和玻璃化冷凍液中時(shí)盡量減少標(biāo)本見(jiàn)光。 2.用液氮填充液氮貯存器到足夠的深度，深度必須能淹沒(méi)Cryocane上的凍存管（杯），將液氮貯存器放置于顯微鏡邊附近。將凍存管（杯）固定于Cryocane的底端并淹沒(méi)在液氮中，為玻璃化冷凍標(biāo)本做準(zhǔn)備。 3.確定需要做玻璃化冷凍的胚胎?？偸沁x擇最好質(zhì)量的胚泡用于玻璃化冷凍。 4.在將要使用的培養(yǎng)皿和運(yùn)輸/存儲(chǔ)設(shè)備上標(biāo)注必要的信息。 5.在使用前，輕輕正反搖動(dòng)幾次以確保每瓶的平衡液和玻璃化冷凍液充分混勻。 6.在無(wú)菌條件下，用移液管注入20μl平衡液到GPS® 胚胎操作皿中，見(jiàn)圖1。 7.從培養(yǎng)箱中取出帶有胚泡的培養(yǎng)皿并檢查胚胎的質(zhì)量。 8.小心地轉(zhuǎn)移胚泡（一次不得超過(guò)兩個(gè)）到平衡液滴頂部并開(kāi)始計(jì)時(shí)，盡量減少帶出的培養(yǎng)液（或保存液）。胚泡需要在自由降落過(guò)程中在平衡液中平衡5~15分鐘。胚泡會(huì)縮小然后逐漸重新擴(kuò)張到原來(lái)的大小，這表明平衡過(guò)程完成。 9.當(dāng)胚泡在平衡液中平衡時(shí)，分別取4滴20μl玻璃化冷凍液到GPS® 胚胎操作皿中(VS1, VS2, VS3, VS4) 。 注意：以下步驟（10-15）必須在90~110秒以內(nèi)完成。 10.在平衡液中的平衡過(guò)程完成以后，吸取少許玻璃化冷凍液進(jìn)入移液管并且轉(zhuǎn)移胚泡到第一滴玻璃化冷凍液滴(VS1)的中央，并且握持5秒鐘。 11.從VS1中快速轉(zhuǎn)移胚泡到第二滴玻璃化冷凍液滴(VS2)的中央，并且握持5秒鐘。 12.從VS2中快速轉(zhuǎn)移胚泡到第三滴玻璃化冷凍液滴(VS3)的中央，并且握持10秒鐘。 13.最后，從VS3中快速轉(zhuǎn)移胚泡到第四滴玻璃化冷凍液滴(VS4)的底部。 14.關(guān)于玻璃化冷凍的步驟，需遵照玻璃化冷凍載體的說(shuō)明。小心地將胚泡從VS4中轉(zhuǎn)移到玻璃化冷凍載體中，然后進(jìn)行冷凍載體說(shuō)明規(guī)定的操作。 15.提示：從把胚泡放置到VS1到浸入到液氮中的總時(shí)間不應(yīng)該超過(guò)已經(jīng)確定的此步驟的最優(yōu)化時(shí)間，當(dāng)然也不應(yīng)該超過(guò)100秒鐘。 16.存儲(chǔ)到液氮中：（執(zhí)行所有這些步驟是，都必須確保玻璃化的樣品充分浸在液氮中，以防止不可逆的解凍）。轉(zhuǎn)移玻璃化的樣品進(jìn)入已經(jīng)標(biāo)寫好的并且固定在Cryocane上的凍存管（杯）上，用另一個(gè)凍存管（杯）倒置扣在其頂部當(dāng)作蓋子用，然后把Cryocane轉(zhuǎn)移到液氮罐中。 17.如果需要玻璃化冷凍更多的胚泡，重復(fù)上述4~16步驟，需要使用新的GPS® 胚胎操作皿以及新鮮的平衡液和玻璃化冷凍液。 global® DMSO 胚泡冷凍套裝溶液用于人胚泡玻璃化冷凍的操作步驟圖示，請(qǐng)查看說(shuō)明。 圖8 插圖說(shuō)明 ES = 平衡液 VS1 = 第一滴玻璃化冷凍液 VS2 = 第二滴玻璃化冷凍液 VS3 = 第三滴玻璃化冷凍液 VS4 =第四滴玻璃化冷凍液 T = 放置于液滴頂端 C =放置于液滴中央 B =放置于液滴底部 時(shí)間指示是指胚泡在每液滴中的時(shí)間 產(chǎn)品名稱 global® DMSO 胚泡玻璃化冷凍套裝 訂購(gòu)號(hào)DMVT-002 產(chǎn)品名稱global® DMSO 胚泡玻璃化冷凍套裝（基于S3） 訂購(gòu)號(hào)GBVI-003