品牌：lifeglobal 圖5 global® DMSO Blastocyst 玻璃化冷凍復(fù)溫套裝 ·1瓶1ml解凍液1，包含蔗糖和10mg/ml的HSA，使用 global® w/HEPES緩沖液。 ·1瓶1ml解凍液2，包含蔗糖和10mg/ml的HSA，使用 global® w/HEPES緩沖液。 ·1瓶1ml解凍液3，包含10mg/ml的HSA，使用 global® w/HEPES緩沖液。 ·4個(gè)SunIVF embryo GPS® 操作皿，產(chǎn)品經(jīng)過(guò)無(wú)菌、內(nèi)毒素和MEA檢測(cè)。 使用說(shuō)明 1.再水合過(guò)程應(yīng)該在20-27°C下進(jìn)行。 2.在培養(yǎng)設(shè)備中孵化時(shí)盡量減少標(biāo)本見光。 3.在使用 global® DMSO Blastocyst玻璃化冷凍復(fù)溫套裝(解凍液1, 解凍液2 and 解凍液3)之前，將其升溫至20-27°C。 4.參閱玻璃化冷凍載體生產(chǎn)商關(guān)于所使用載體的使用說(shuō)明。 5.用液氮填充液氮貯存器到足夠的深度，深度必須能完全淹沒(méi)裝有載體的凍存管（杯），將液氮貯存器放置于包含有要解凍的玻璃化樣品的液氮罐附近。 6.將載體從Cryocane和凍存管（杯）中取出并且快速轉(zhuǎn)移到裝有液氮的液氮貯存器中，保持載體始終浸在液氮中。 7.把液氮貯存器放置于顯微鏡附近，以方便快速操作。 8.在SunIVF embryo GPS® 操作皿上標(biāo)記所有必要的信息。 9.使用前，把每瓶解凍液1、解凍液2、解凍液3 輕輕正反搖動(dòng)幾次將其搖勻。 10.在無(wú)菌條件下，轉(zhuǎn)移20 μl 解凍液1到SunIVF embryo GPS®（W1a）中，見圖2。 11.轉(zhuǎn)移兩滴20 μl 解凍液2到SunIVF embryo GPS®（W2a & W2b）中，見圖2。 復(fù)溫和再水合 12.用鑷子找到液氮存儲(chǔ)器內(nèi)凍存管（杯）中的載體，此時(shí)只有處理一個(gè)載體。 13.小心載體從凍存管（杯）中取出，保持裝有胚泡的部分在液氮液面以下。 14.遵照載體的使用說(shuō)明進(jìn)行復(fù)溫和打開載體，然后立即轉(zhuǎn)移載體中的內(nèi)容物（約1μl）到embryo GPS® 操作皿中，見圖2。防止轉(zhuǎn)移內(nèi)容物時(shí)形成泡泡。 15.從W1a中取大約1μl 溶液并轉(zhuǎn)移到包含胚泡的液滴旁邊，見圖2（W1b）。 16.使用玻璃化冷凍用具融合兩個(gè)液滴，讓兩者逐漸混合一分鐘。 17.從W1a中取少量溶液到移液管中，然后使用它從W1b拾起胚泡并轉(zhuǎn)移到W1a的底部。 18.在W1a中握持胚泡1分鐘。胚泡將縮小并浮在液滴的頂部。 19.提示：在下面的步驟中，每次轉(zhuǎn)移胚胎以后，進(jìn)行下一操作之前，都要排出所有移液管中的液體并從下一滴溶液中吸取一些溶液。在轉(zhuǎn)移過(guò)程中要避免產(chǎn)生泡泡。 20.將胚泡從W1a中轉(zhuǎn)移到W2a底部。 21.將胚泡在W2a中握持2分鐘。 22.將胚泡從W2a中轉(zhuǎn)移到W2b底部。 23.將胚泡在W2b中握持2分鐘。 24.提示：胚泡在W2a和W2b中仍然保持縮小的狀態(tài)。 25.在W2b的握持時(shí)間內(nèi)，轉(zhuǎn)移三個(gè)20μl的解凍液3到embryo GPS® 操作皿中，見圖2（W3a, W3b & W3c）。 26.將胚泡從W2b中轉(zhuǎn)移到W3a底部。 27.將胚泡在W3a中握持3分鐘。 28.將胚泡從W3a中轉(zhuǎn)移到W3b頂部。 29.將胚泡在W3b中握持3分鐘。 30.將胚泡從W3b中轉(zhuǎn)移到W3c頂部。 31.將胚泡在W3c中握持3分鐘。 32.最后，將胚泡轉(zhuǎn)移到一個(gè)已經(jīng)裝有預(yù)先平衡過(guò)的合適的培養(yǎng)基的embryo GPS® 操作皿中，并且在CO2培養(yǎng)箱37°C培養(yǎng)3~4小時(shí)，以便在胚胎移植前做進(jìn)一步的操作。 如果需要解凍更多的胚泡，重復(fù)上述8~22步驟，需要使用新的GPS® 胚胎操作皿以及新鮮的平衡液和玻璃化冷凍液。 global® DMSO 胚泡復(fù)溫套裝溶液用于已玻璃化冷凍的人胚泡的解凍操作步驟圖示，請(qǐng)查看說(shuō)明。 圖6 插圖說(shuō)明 W1a = 解凍液1 – Drop a W1b =解凍液1 – Drop b W2a = 解凍液2 – Drop a W2b =解凍液2 – Drop b W3a = 解凍液3 – Drop a W3b = 解凍液3 – Drop b W3c =解凍液3 – Drop c B = 液滴底部 T = 液滴頂部 時(shí)間指示是指胚泡在每液滴中的時(shí)間 產(chǎn)品名稱 global® DMSO 胚泡玻璃化復(fù)溫套裝 訂購(gòu)號(hào)DMVR-003 產(chǎn)品名稱global® DMSO 胚泡玻璃化復(fù)溫套裝（基于S3） 訂購(gòu)號(hào)GBTH-005