實(shí)驗(yàn)原理:細(xì)胞在發(fā)生凋亡時(shí),會(huì)激活一些DNA內(nèi)切酶,這些內(nèi)切酶會(huì)切斷核小體間的基因組DNA,可產(chǎn)生180-200bp的DNA片段?;蚪MDNA斷裂時(shí),暴露的 3’-OH可以在末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶(Terminal Deoxy nucleotidyl Transferase,TdT)的催化下,加上熒光素(FITC)標(biāo)記的dUTP,從而可以通過(guò)熒 光顯微鏡或流式細(xì)胞儀進(jìn)行凋亡的檢測(cè)。在此基礎(chǔ)上接辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的熒光素抗體,可進(jìn)一步放大檢測(cè)信號(hào),可在普通顯微鏡下觀察實(shí)驗(yàn)結(jié)果。由于正常的或正在增殖的細(xì)胞幾乎沒(méi)有DNA斷裂,因而沒(méi)有3’-OH形成,很少能夠被染色。
分類(lèi):Tunel染色分為普通法和熒光法兩種。
用途:可用于石蠟包埋組織切片、冰凍組織切片、培養(yǎng)的細(xì)胞凋亡測(cè)定,靈敏度比一般的組織化學(xué)和生物化學(xué)高。
樣本要求:
1、石蠟切片:取下適當(dāng)?shù)男迈r的組織塊固定于4%-10%濃度的多聚甲醛或中性甲醛中,甲醛與組織塊體積比在10:1和20:1之間,4度保存運(yùn)輸。
2、冰凍切片:取下的新鮮組織應(yīng)立即放入超低溫冰箱或者液氮中,用干冰運(yùn)輸,固定好的切片應(yīng)于-80或者-20度保存,并盡快用于檢測(cè)。
3、細(xì)胞爬片:細(xì)胞爬片4%多聚甲醛固定30分鐘,換PBS緩沖液4度保存運(yùn)輸,并盡快用于檢測(cè)。
提供的服務(wù):包含試劑盒,切片,染色,拍照,每個(gè)樣本提供一張照片包含凋亡率。