凝膠成像定義
凝膠成像即:對DNA或RNA膠
進行切膠、拍照、觀察、分析 ,的實驗室類儀器,凝膠成像系統(tǒng)可以應用于分子 量計算,密度掃描,密度定量, PCR定量等生物工程常規(guī)研究。
凝膠成像應用范圍
總體上來說凝膠成像可應用于:凝膠成像系統(tǒng)可以用于:蛋白質、核酸、多肽、氨基酸、多聚氨基酸等其他生物分子的分離化結果作定性分析
?。?)分子量定量
對于一般常用的DNA膠片,利用分子量定量功能,通過對膠上DNA Marker條帶的已知分子量注釋,自動生成擬合曲線,并以它衡量得到未知條帶的分子量。通過這種方法所得到的結果較肉眼觀察估計要準確很多。
?。?)密度定量
一般常用的測定DNA(脫氧核糖核酸)和RNA(核糖核酸)濃度的方法是紫外吸收法,但它只能測定樣品中的總核苷酸濃度,而不能區(qū)分各個長度片段的濃度。利用凝膠成像系統(tǒng)和軟件,先將DNA膠片上某一已知其DNA含量的標準條帶進行密度標定以后,可以方便的單擊其他未知條帶,根據(jù)與已知條帶的密度做比較,可以得到未知DNA的含量。此方法也適用于對PA GE蛋白膠條帶的濃度測定。
?。?)密度掃描
在分子生物學和生物工程研究中,常用到的是對蛋白表達產物占整個菌體蛋白的百分含量的計算。傳統(tǒng)的方法是利用專用的密度掃描,但利用生物分析軟件結合現(xiàn)在實驗室常規(guī)配備的掃描儀或者直接用白光照射的凝膠成像就能完成此項工作。
?。?)PCR定量
PCR定量主要是指,如果PCR實驗擴增出來的條帶不是一條,那么可以利用軟件計算出各個條帶占總體條帶的相對百分數(shù)。就此功能而言,與密度掃描類似,但實際在原理上并不相同。PCR定量是對選定的幾條帶進行相對密度定量并計算其占總和的百分數(shù),密度掃描時并對選擇區(qū)域生成縱向掃描曲線圖并積分。
凝膠成像種類
?。?)普通凝膠成像分析系統(tǒng):可以對蛋白電泳凝膠,DNA凝膠樣品進行圖象采集并進行定性和定量分析,樣品包括:EB、SYBR Green、SYBR Gold、Texas Red、GelStar、Fluoroscecin、 Radiant Red等染色的核酸監(jiān)測;以及Coomassie Blue、SYPRO Orange、各種染色的蛋白質凝膠如考染等。(或UV,EB和有色及可見樣品成像);
?。?)化學發(fā)光成像分析系統(tǒng):成像范圍涵蓋UV,EB,化學發(fā)光、紫外-熒光、有色及可見樣品成像;
?。?)多色熒光成像分析系統(tǒng):成像范圍涵蓋UV,EB,化學發(fā)光、多色熒光熒光、有色及可見樣品成像;
?。?)多功能活體成像分析系統(tǒng):UV,EB,化學發(fā)光、多色熒光熒光、有色及可見樣品成像和離體組織和小型動物,及大型型動物。
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