二組織化學(xué)和細(xì)胞化學(xué)染色法組織化學(xué)和細(xì)胞化學(xué)，是將物理和化學(xué)的技術(shù)運(yùn)用到組織標(biāo)本，用顯微鏡和化學(xué)分析方法來研究組織和細(xì)胞內(nèi)的化學(xué)成分，并觀察該化學(xué)成分在組織、細(xì)胞內(nèi)的定位、含量及其變化規(guī)律。這些化學(xué)成分借著化學(xué)反應(yīng)所產(chǎn)生的不溶性著色物質(zhì)來顯示。對(duì)于某些化學(xué)成分，例如：Fe 糖原、核酸等，可以用直接或間接的化學(xué)反應(yīng)產(chǎn)生著色沉淀而顯示其部位和相對(duì)含量。對(duì)于酶類，顯示它的活性，須有該種酶的底物（被該種酶作用的物質(zhì)），由酶對(duì)底物的分解，直接或間接地生成著色物質(zhì)而被顯示。凡是在光學(xué)顯微鏡下觀察細(xì)胞原位顯示的化學(xué)物質(zhì)，稱組織化學(xué)，若用電鏡觀察細(xì)胞原位化學(xué)成分的著色部位，則稱電鏡細(xì)胞化學(xué)，石蠟包埋切片制作法這是常用的切片法。以石蠟作為組織的填充支持介質(zhì)，將整塊組織加以包埋，后凝固成均勻一致的固態(tài)結(jié)構(gòu)。用切片機(jī)制取極薄的切片。為了讓石蠟?zāi)芙虢M織內(nèi)部，需將組織經(jīng)過脫水等處理。過程大致如下：⑴固定：生物標(biāo)本脫離機(jī)體或培養(yǎng)環(huán)境，細(xì)胞會(huì)發(fā)生自溶，腐敗分解。因此，需用固定劑處理，使蛋白質(zhì)凝固停止瀕死或死后變化。凡供保存的標(biāo)本都需經(jīng)固定處理。常用的固定劑是甲醛、乙醇等，能使蛋白質(zhì)凝固。還有由幾種試劑配成的固定液，例如Carnoy固定液，由無水酒精、氯仿、冰醋酸配成，固定力更快更強(qiáng)，不含水分，可避免水溶性物質(zhì)如糖原等在固定過程中損失。石蠟包埋切片的HE染色法分色后用自來水或加數(shù)滴氨水堿化，直至細(xì)胞核變成藍(lán)色。這一步驟也可稱為“藍(lán)化”。入蒸餾水洗去堿性水分。入70%酒精→80%酒精各5分鐘。入伊紅染液染色30秒至數(shù)分鐘。以95%酒精對(duì)伊紅分色，至胞漿，結(jié)締組織等呈桃紅色。上行脫水：染色后的切片，因組織內(nèi)含水而不透明，不能清晰地觀察其微細(xì)結(jié)構(gòu)。因此，須將組織內(nèi)的水分經(jīng)各級(jí)酒精→無水酒精逐步置換，后進(jìn)入不含水份的透明劑內(nèi)。透明：入二甲苯透明劑，二次（各數(shù)分鐘）。取出切片：將組織周圍多余的二甲苯擦去，滴樹膠后加蓋玻片封固。結(jié)果：細(xì)胞核藍(lán)紫色，胞漿、膠原纖維、肌纖維為桃紅色，嗜酸性顆粒為鮮紅色，彈性纖維呈明亮桃紅色。